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使用顯色液時(shí)需要注意哪些要點(diǎn)？
更新時(shí)間：2022-03-25 點(diǎn)擊次數(shù)：1416次
顯色液SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體( 例如硝酸纖維素薄膜)后，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色以檢測(cè)電泳分離的特異性的蛋白。
顯色液的使用要點(diǎn)：
1.請(qǐng)根據(jù)一抗來(lái)源選擇試劑盒.
2 westem blotting DAB顯色法操作簡(jiǎn)單，但其敏感性與ECL發(fā)光發(fā)有一定的差距，一般只適用于豐度較高的蛋白.
3.可以根據(jù)顯色結(jié)果來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間。如背景過(guò)深，可延長(zhǎng)膜封閉時(shí)間，加長(zhǎng)較終漂洗次數(shù)與時(shí)間。如果條帶過(guò)弱，同遠(yuǎn)長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間。
4.如果*沒(méi)有條帶，請(qǐng)檢查前期蛋白處理及實(shí)驗(yàn)過(guò)程，如果確認(rèn)無(wú)誤， 反復(fù)兩次依舊無(wú)結(jié)果，請(qǐng)換用ECL發(fā)光法顯色。
5. TBST (0.01M)配制方法:稱取NaCl8.5g，Tris 1.21g，用800ml的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào)PH到76,再
加入0SmlTween-20，用雙蒸水加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習(xí)慣來(lái)配制)
顯色液的保存：
-20C避光密閉保存，- 年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和20倍DAB顯色液B存放于2-8C以方便使用。
